产品货号:
KD1201
中文名称:
DNA非变性PAGE制胶及电泳试剂盒(8%可制胶1L)
英文名称:
DNA non-denaturing PAGE electrophoresis kit
产品规格:
1L
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
保存:2~8℃
储存条件:Acr-Bis溶液4℃保存,有效期2年。
规格说明:配置终浓度8%的胶可以配置1L,终浓度20%的胶可以配置400mL。
产品组成:
注意:过硫酸铵(APS)为固体粉末,使用前配制成10% APS溶液(0.1g APS加1mL双蒸水)。APS溶液最好现配现用,通常4℃可保存一周,-20℃能保存半年。
操作步骤:
用于SSCP-PCR分析的非变性PAGE电泳(其他应用请相应修改参数)
一、PAGE浓度和交联度的选择指南
1.DNA-PAGE一般推荐用29:1(丙烯酰胺:甲叉双丙烯酰胺)的交联度,在此条件下,DNA片段和最适PAGE浓度对应关系如下:
二、胶制备DNA-PAGE胶(参照附表)
1.参照附表的配置合适浓度的PAGE胶,摇晃混匀。
2.将配置好的胶倒入胶板,在胶的液面距离达到顶部时停止灌胶,插入梳子。
3.室温聚合30~60分钟(低温抑制聚合反应,故最好室温)。
4.待胶凝固后拔出梳子,用0.5×TBE液冲洗加样孔。
三、样品处理
取待测样品,加入相应体积的6×DNA loading buffer,如10μL样品加入2μL的上样液,混合后取5~10μL上样。
四、电泳
1.将凝胶板固定在电泳装置上,往上槽和下槽中加入足够0.5×TEB电泳液。
2.预电泳5~30分钟后,将冰上放置的样品上样。
3.连接电源线,打开电源开关。根据胶的大小选择功率(固定功率可以固定产热,这样不容易发生过热而使胶板破裂的现象。如果固定电流或电压,产热都将随电泳时间而变化,不好控制)。对小胶一般用5-6W固定功率,大胶用15-25W固定功率。
4.终止电泳,取出凝胶进行后续的处理(如银染)。注意:如果银染,必须延长固定时间以便洗出尿素,否则残留尿素会干扰后面的银染。
注意事项:
1.APS溶液不稳定,每次取用后立即放回冰箱,以防失效;若发现凝胶聚合时间延长,应考虑更换10% APS。
2.PAGE凝胶的凝聚速度与温度以及APS、TEMED的用量密切相关;可通过改变APS及TEMED的用量,控制PAGE凝胶的聚合速度,凝胶聚合过快不利于操作。
3.在凝胶配制过程中,尤其是液体混匀步骤,应尽量避免气泡的产生。
4.丙烯酰胺具有神经毒性,操作时请穿戴实验服和一次性手套。
附表:(单位mL,TBE可选终浓度0.5×或者1×)
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